产品货号：
GS0100
中文名称：
磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称：
Mag-BB Bacterial Genomic DNA Extraction Kit
产品规格：
50次|100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用Buffer MBSL和Proteinase K裂解细菌细胞，释放出基因组DNA，在结合液的作用下MagicMag Beads选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去MagicMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下MagicMag Beads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。从1mL的菌液中可以获得10～20μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。
| 组分 | 50次 | 100次 |
| Buffer MBSL | 25mL | 50mL |
| Buffer PB | 12mL | 24mL |
| MagicMag Beads | 500μL | 1mL |
| Buffer MB | 30mL | 60mL |
| Proteinase K | 1.2mL | 2.4mL |
| Enzymatic lysis Buffer | 10mL | 20mL |
| TE Buffer(pH8.0) | 10mL | 20mL |
保存：室温，其中MagicMag Beads和Proteinase K请置于2～8℃。
磁力架、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、水浴锅、1.5mL离心管、70%乙醇和RNase A溶液(10mg/mL)。
- 每次使用前请检查Buffer MBSL是否有沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解沉淀后使用。
- Buffer MBSL中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
- 向1.5mL离心管中加入1mL过夜培养的细菌培养液，10000rpm离心2min，弃上清，收集菌体。
● 对于革兰氏阳性菌，收集菌体后向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体，37℃水浴30min，间或混匀直至细胞壁完全破碎，再进行第2步操作。
● 溶菌酶使用前请将相应量的溶菌酶加入到Enzymatic lysis buffer中，配制成20mg/mL的溶菌酶溶液。
● 对于细胞壁较厚的革兰氏阳性菌，如金黄色葡萄球菌，若采用溶菌酶破壁效果不理想，可以加入少量的溶葡球菌酶帮助破壁。 - 向离心管中加入400μL Buffer MBSL和20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。70℃水浴20min至溶液完全澄清。
- 取出离心管，并向离心管中加入150μL Buffer PB，充分混匀，12000rpm离心5～10min，小心吸取500μL上清至新的离心管中。
● 如需得到无RNA的DNA，请向上清液中加入20μL RNase A，混匀之后室温放置5min。 - 向离心管中加入500μL Buffer MB和10μL MagicMag Beads，吸打或者点振混匀，室温静置1min。
● 向离心管中加MagicMag Beads之前，请将其充分混匀。
● 请务必将MagicMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留的MagicMag Beads吸打干净。
● 处理多个样品时，可先将Buffer MB与MagicMag Beads按50：1的体积比混匀，然后向每管上清液中加入510μL，上述混合液加入过程中请间或混匀，确保磁珠呈悬浮状态。 - 将离心管置于磁力架上30 s，待MagicMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
● 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
● 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。
● 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，吸净管底的上清。 - 向离心管中加入900μL 70%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待磁珠完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
● 吸弃上清前，若管口粘有少量MagicMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
● 吸弃上清时，请勿吸入MagicMag Beads，尽量吸净上清。 - 重复步骤6一次，室温开盖干燥15～20min或者55℃恒温箱中开盖干燥5～7min至管内无液体残留。
● 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
● 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。 - 向离心管中加入50～100μL TE Buffer，65℃水浴5～10min，间或混匀。
● 请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
● 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。 - 取出离心管并置于磁力架上30s，待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。
● 吸取上清前，请确保MagicMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagicMag Beads，否则影响基因组DNA的纯度。
- 得率低
- 细菌生长不好，细菌培养液中菌体含量太少。请将细菌重新转接活化或者加大细菌培养液的量之后再离心收集菌体。
- 裂解不充分。有些革兰氏阳性菌的细胞壁很厚，20mg/mL的溶菌酶不能将其细胞壁破碎，请使用高浓度的溶菌酶。对于金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌等葡萄球菌破壁时，除了加入溶菌酶，还需加入少量的溶葡球菌酶帮助破壁。
- 结合不充分。加入Buffer MB和NucleoMag Beads之后，请将其充分混匀，并使NucleoMag Beads处于悬浮状态。
- 过程中丢失NucleoMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的NucleoMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的NucleoMag Beads也吸附在管壁上。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有NucleoMag Beads充分悬浮在TE Buffer中。
- 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下NucleoMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下NucleoMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，NucleoMag Beads释放出大量的基因组DNA。
- 细菌生长不好，细菌培养液中菌体含量太少。请将细菌重新转接活化或者加大细菌培养液的量之后再离心收集菌体。
- 获得的DNA条带弥散
- 菌体不新鲜。请使用新鲜培养的细菌培养液收集菌体。
- 裂解时间过长。裂解时间请不要超过30min。
- 菌体不新鲜。请使用新鲜培养的细菌培养液收集菌体。
- 获得的DNA断裂、降解
- 细菌培养液放置时间过久。请使用新鲜培养的细菌培养液。
- 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
- 细菌培养液放置时间过久。请使用新鲜培养的细菌培养液。
- DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管管内的液体。
- NucleoMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使NucleoMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
- NucleoMag Beads没有完全干燥。请将NucleoMag Beads完全干燥保证无乙醇残留。
- 最后一步吸取上清时吸入NucleoMag Beads。请确保所有NucleoMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入NucleoMag Beads，请将上清液放回原管，待NucleoMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。若出现残液挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管管内的液体。
- 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
- 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
- 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
- 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。
- 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
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